PCR实验室的四个区域应注意正压负压控制

　　PCR实验室又称基因扩增实验室，其特点是能将微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物学研究和实验的常规方法，广泛应用于生物学各个领域。例如：艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断，DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证、动植物检疫，动物及其衍生产品检测，动物饲料、化妆品、食品卫生检测，转基因作物与转基因微生物检测等。

　　原则上分为四个区域：试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区。

　　PCR实验室原则上为试剂准备区、样品制备区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域并设有专用走廊，各工作区域应设缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密相连，需安装物品传递窗。

　　PCR实验室区域的设置并不是一成不变的，以下几种情况需要说明：

　　1.如果样本在扩增之前需要粉碎处理，则需要增加一个区域用于样品的粉碎。

　　2.如果采用实时荧光PCR法，则扩增区和分析区可以合并为一个区。

　　3.如果采用全自动化PCR分析仪，则标本制备区、扩增区和分析区可以合并为一个区。

　　四个区域注意正压负压的控制：

　　1.试剂准备区：

　　主要进行试剂的制备、分装和主反应混合液的制备。试剂和用于样品制作的材料应直接运送至该区，不得经过其它区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的试剂。本区主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器等。

　　对于气流压力的控制，本区并没有严格的要求。

　　2.样品制备区：

　　主要进行样品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。本区主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴等。

　　本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。

　　3.扩增区：

　　该区域的功能是DNA扩增和扩增片段的测定。此外，反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液和已制备的DNA模板(来自标本制备区)的加入等也可在本区内进行。对于气流压力的控制，相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。

　　该区域的设备主要是核酸扩增热循环仪、加样器、超净台等。其中热循环仪的电源应专用，并配备一个稳压电源或UPS，以防止由于电压的波动对扩增测定的影响主要进行DNA扩增。

　　本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。

　　4.扩增产物分析区：

　　扩增产物的测定。本区主要设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。

　　本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。